基因工程改善磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究

2019-08-12 作者:365bet足球赌博   |   浏览(182)
总结:E rTaq可增加磷脂酰丝氨酸合成酶靶蛋白(PSS)的表达。
通过PCR扩增在大肠杆菌K12的总DNA中扩增磷脂酰丝氨酸合酶基因的片段,然后在高效表达载体质粒pET28b中重组,然后转移到相应的表达菌株中进行表达。。对细菌菌株进行超声处理以获得含有PSS的粗酶。
[标题]基因工程改善磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究
[作者]陈梦雪陆新瑞马宇孙明波罗维嘉王培奇常毅常一川
中国沉阳110016沉阳药科大学生命科学与生物制药
[标题]微生物学杂志2014年第5期第44-48页,第5页
[关键词]磷脂酰丝氨酸合成酶基因突变重组同源物的建模
E rTaq酶用于增强磷脂酰丝氨酸合成酶靶蛋白(PSS)的表达。
通过PCR扩增在大肠杆菌K12的总DNA中扩增磷脂酰丝氨酸合酶基因的片段,然后在高效表达载体质粒pET28b中重组,然后转移到相应的表达菌株中进行表达。将反应体系进行生物转化,通过HPLC→ELSD进行酶活性的检测。
结果表明,重组菌株PSS的酶活性大于对照,获得了酶活性提高的突变基因pssE210G。
将突变的基因重组到最有效的表达载体pBAD-MCS中,并转移到相应的宿主菌株中进行表达。
结果是E.
大肠杆菌TOP10(pBAD?MCS?pss)表达的酶活性明显优于E.
酶活性在大肠杆菌BL21(pET28b-pss)中表达。
上述实验结果表明,靶基因在高效表达质粒中的重组可以提高酶的活性。当与不同的表达质粒组合时,酶的活性增加。磷脂酰丝氨酸合酶基因的氨基酸73发生突变,其酶结构和活性具有直接作用。
点击此处下载[下载地址]全文


相关文章